传染病快速诊断套装 HWTS-OT025C

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人类有17%~25%肿瘤带有突变的K-ras基因，其在肺癌患者中的突变率为15~30%，在结直肠癌患者中的突变率为20~50%(数据来源于Sanger数据库)。因为K-ras基因编码的P21蛋白位于EGFR信号通路下游，K-ras基因突变后，下游信号通路始终处于激活状态，不受上游靶向药物对EGFR的影响，导致细胞持续恶性增殖。K-ras 基因突变一般会使肺癌患者对 EGFR 酪氨酸激酶抑制剂产生耐药，使结直肠癌患者对抗 EGFR 抗体类药物产生耐药[1, 2, 3]。2008年美国国立综合癌症网络（NCCN）发布的结直肠癌临床实践指南指出导致K-ras处于激活状态的突变部位主要是位于外显子2的密码子12和13，并推荐所有晚期转移结直肠癌患者在用药前进行K-ras突变检测[4]。因此快速、准确的检测出K-ras基因突变在临床用药指导方面具有重要意义。本试剂盒以 DNA 为检测样本，提供突变状态的定性评估，可辅助临床医生筛选出受益于靶向药物的结直肠癌、肺癌等肿瘤患者。试剂盒检测结果仅供临床参考，不应作为患者个体化治疗的唯一依据，临床医生应结合患者病情、药物适应症、治疗反应及其他实验室检测指标等因素对检测结果进行综合判断。 【检验原理】 本检测试剂盒采用针对野生型序列的特异阻断技术与Taqman探针相结合方法检测位于人12号染色体K-ras 基因2号外显子的8种热点突变。Taqman探针分别标记一个报告荧光基团FAM和一个淬灭荧光基团BHQ2。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’－3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。K-ras检测反应液中含有的阻断成分，通过特定的 PCR 反应程序，可特异性阻断野生型扩增，突变型扩增不受影响，Taqman探针与突变型扩增产物结合，在实时 PCR 平台上实现对样品 DNA 中突变的检测。 检测体系中含有一定比例的dUTP、dNTP和尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG酶），这种酶（也称为尿嘧啶-N-糖基化酶或UNG酶）可以打断含有dUTP的PCR产物，从而有效的防止PCR污染。 内参反应液选择的检测区域是人K-ras基因相对保守的区段，约150bp，作为对试剂、DNA质量以及操作本身的质控，即便DNA有降解，通过内参能够真实地反应体系中基因有效的DNA 量。 【储存条件及有效期】 本试剂盒应储存于-18℃以下的避光条件下，有效期为9个月（请于有效期内使用）。反复融次数不得多于4次，在-18℃以下的避光条件下运输，可稳定保存5天。 生产日期及失效日期见标签。