EliGene® NGS 试剂盒可对感兴趣基因的所有必要目标区域进行多重 PCR 扩增。每个多重 PCR 反应的建议 DNA 量为 20 至 100 纳克,取自福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)材料或血液。然后,用 MID 序列对产生的扩增子进行条形码编码,并按每个样本进行混合。根据制造商的说明,使用 Illumina 大型并行测序 (MPS) NGS 仪器对样本进行量化和测序。随后将得到的序列读数与目标基因的参考序列进行比较分析,以确定变异位置。
简介
EliGene® NGS 试剂盒用于一个或多个多重 PCR 反应,扩增一个样本的目标区域。扩增使用的是含有热启动 DNA 聚合酶的即用型母液。将每个多重反应产生的扩增子稀释 100 倍。第二步,使用 EliGene® Adaptor-IL NGS 试剂盒进行第二轮 PCR,对所有扩增子进行标记,加入 Illumina MiSeq 测序所需的 MID、p7 和 p5 适配体。按照预定义的检测特定混合方案,将每个个体产生的标记扩增子进行混合。随后对每个扩增子文库进行纯化,去除短于 150bp 的小残留 DNA 片段,并使用浓度标准实时 PCR 测定 DNA 浓度。
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