本 ELISA 试剂盒采用三明治-ELISA 原理。试剂盒中的微量酶联免疫吸附板已预先包被小鼠 IFN-γ 的特异性抗体。将标准品或样品加入微量酶联免疫吸附板孔中,与特异性抗体结合。然后在每个微孔板孔中依次加入小鼠 IFN-γ 的特异性生物素化检测抗体和阿维丁-辣根过氧化物酶(HRP)共轭物并孵育。洗去游离成分。在每个孔中加入底物溶液。只有含有小鼠 IFN-γ、生物素化检测抗体和阿维丁-HRP 结合物的孔才会呈现蓝色。加入终止液后,酶-底物反应终止,颜色变为黄色。光密度(OD)在 450 nm ± 2 nm 波长下用分光光度法测量。OD 值与小鼠 IFN-γ 的浓度成正比。将样品的 OD 值与标准曲线进行比较,即可计算出样品中小鼠 IFN-γ 的浓度。
技术数据
由于标准曲线的 OD 值可能会因实际检测条件(如操作者、移液技术、洗涤技术或温度影响)而不同,操作者应为每次检测建立标准曲线。以下是典型的标准曲线和数据,仅供参考。
精确度
化验内精密度(化验内的精密度):在一个平板上对低浓度、中浓度和高浓度的 3 个样品分别检测 20 次。
检测间精度(检测之间的精度):在 3 个不同的平板上分别检测低、中、高浓度的 3 个样品,每个平板 20 个重复。
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