mRNA表达水平的测量--无论是通过Northern分析、核糖核酸酶保护,还是实时定量PCR--通常通过将数据与内部或内源性参考基因的数据进行比较而标准化。管家基因如β-肌动蛋白和甘油-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)最常被使用,因为它们的表达水平预计在不同的处理条件下会保持不变。不幸的是,这种假设并不总是有效的,仅基于看家基因的结果可能有偏差(Suzuki, Higgins, and Crawford 2000)。一个更好的方法是使用我们的qPCR人类参考cDNA对你的数据进行标准化,这是唯一一个完全来自于人类组织的cDNA对照。
qPCR人类参考cDNA是比较不同定量PCR(qPCR)实验数据的理想对照。由于它是从几个不同组织中收集的总RNA池中制备的,我们的qPCR人类参考cDNA提供了广泛的基因覆盖,正如RNA起始材料的微阵列分析所示。从整个组织中制备的RNA以及cDNA比从细胞系中制备的RNA具有更好的基因代表性,且变化更小(数据未显示)。此外,PCR分析显示,我们的总RNA几乎不含基因组DNA。这使得我们可以更准确地测量转录本的拷贝数。高丰度和低丰度的基因都有很好的代表性,允许为每个qPCR检测准备广泛的连续稀释标准。参考cDNA的批次间差异很小,因为RNA来源是以工业规模制备的。
概述
广泛的基因覆盖
几乎不含基因组DNA
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