研究快速诊断套装 LS-K268

总蛋白ATP腺一磷酸

5-AMP 活化蛋白激酶（AMPK）是细胞内能量平衡的一个关键传感器。肌肉收缩、饥饿或缺氧等多种因素都可能导致 AMP/ATP 比率升高，AMPK 因此被激活。AMPK 是一种由 Alpha-（63 kDa）、Beta-（38 kDa）和 Gamma-（38 kDa）亚基组成的异源三聚体蛋白复合物。每个亚基都有同工型（α-1、α-2、β-1、β-2、γ-1、γ-2、γ-3），理论上可形成 12 种不同的蛋白质。α-亚基含有丝氨酸/苏氨酸激酶结构域，调节亚基含有与 AMP、ATP 和糖原结合的位点。AMPK 通过催化域 Thr-172 上的磷酸化激活。与 AMP 结合后，AMPK 的活性会比基础水平提高 2 到 5 倍。AMP 与 Alpha 亚基结合会导致激酶的异位激活，并诱导激酶结构域发生构象变化，从而保护 AMPK 免受 Thr-172 的去磷酸化。这种基于细胞的酶联免疫吸附试验可检测全细胞中磷酸化的 AMPK，并将信号与总蛋白含量进行归一化。该抗体可识别两种 Alpha 亚基，因此可用于所有组织（人、小鼠、大鼠）的细胞。这种简单高效的检测方法无需制备细胞裂解液，可用于研究 AMPK 的短期和长期调控。在这项检测中，96 孔板中生长的细胞在孔中固定并透化。使用荧光酶联免疫吸附法测定 AMPK 磷酸化（pAMPK），然后测量各孔中的总蛋白。