研究快速诊断套装 CFTK-HMM-0076

医学研究凝血TMB

产品名称
人活化凝血因子VIIa (FVIIa) ELISA试剂盒（货号：CFTK-HMM-0076）

适用范围
用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清及相关液体样本中的人活化凝血因子VIIa (FVIIa)。

检测原理
本试剂盒采用双抗体一步法夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将样品、标准品和HRP标记的检测试剂依次加入预包被有抗FVIIa捕获抗体的微孔板，孵育并充分洗涤。用TMB显色，过氧化物酶催化呈蓝色，酸终止后变为黄色。显色深浅与样品中FVIIa浓度成正比，在450 nm处测定吸光度并计算样品浓度。

样品处理

• 血清：将采集于血清分离管的全血于室温放置2小时或4°C过夜凝固，1000×g离心20分钟取上清；如需保存可置于-20°C或-80°C，避免反复冻融。
• 血浆：采集时使用EDTA或肝素作抗凝剂，采血后30分钟内于2–8°C条件下1000×g离心15分钟取上清；如需保存可置于-20°C或-80°C，避免反复冻融。
• 组织匀浆：用预冷PBS（0.01 M，pH7.4）冲洗组织以去除残血，称重切块，按1:9（w/v）比例加入PBS，可选加蛋白酶抑制剂，在冰上匀浆，视需要超声或反复冻融，5000×g离心5–10分钟取上清用于检测。
• 细胞培养上清或其他生物样品：上清1000×g离心20分钟取上清用于检测，或置于-20°C/-80°C保存。血溶样本不适合用于本检测。

所需试剂/仪器/耗材

• 酶标仪（450 nm）
• 高精度移液器与移液器吸头：0.5–10 µL、2–20 µL、20–200 µL、200–1000 µL
• 37°C培养箱或恒温箱
• 蒸馏水或去离子水

标准品浓度

• 16 ng/mL
• 8 ng/mL
• 4 ng/mL
• 2 ng/mL
• 1 ng/mL
• 0.5 ng/mL

试剂配制
从冷藏环境取出时，使用前应使试剂回温至室温。20×洗涤液稀释：用蒸馏水按1:20稀释（20×洗涤液1份配19份蒸馏水）。

操作流程（概要）

• 1. 将板在室温平衡20分钟，使用所需孔，剩余板封存并4°C保存。
• 2. 向标准孔加入50 µL不同浓度的标准品。
• 3. 向样品孔加入50 µL样品；空白孔不加样品。
• 4. 向每个标准孔和样品孔（空白孔除外）加入100 µL HRP标记的检测试剂，封板并在37°C孵育60分钟。
• 5. 弃去液体，用350 µL洗涤液洗涤每孔，静置1分钟，重复洗涤5次（或使用洗板机）。
• 6. 向每孔加入50 µL A液和50 µL B液，37°C孵育15分钟。
• 7. 向每孔加入50 µL终止液，并在15分钟内于450 nm处测定OD值。

结果计算
以标准品的OD值（横轴）与标准浓度（纵轴）绘制标准曲线，获得线性回归方程，将样品OD代入方程计算样品浓度。

性能

• 检测范围：0.5–16 ng/mL
• 灵敏度：< 0.1 ng/mL
• 特异性：不与其他相关可溶性类似物交叉反应
• 重复性：孔内CV < 10%；孔间CV < 15%

注意事项 / 重要提示

• 1. 对超过标准最高浓度的样品需在检测前用样品稀释液适当稀释。
• 2. 严格按照规定的孵育时间和温度操作；使用前将所有试剂恢复至20–25°C，使用后冷藏保存。
• 3. 洗板不当或孔干会导致结果不准确；确保排液良好并在孵育过程中避免孔干。
• 4. 清除板底残留液体和指纹以避免OD干扰。
• 5. 基质溶液应为无色或极淡色；若已变蓝请勿使用。
• 6. 避免试剂与样品之间交叉污染。
• 7. 存储和孵育过程中避免强光直射。
• 8. 在打开密封袋前使其回温至室温以防结露。
• 9. 反应试剂勿接触漂白剂或强溶剂蒸气。
• 10. 请勿使用过期产品。
• 11. 若样品可能具有感染性风险，请按规定的生物安全程序处理样品和检测装置。

技术规格

• 货号：CFTK-HMM-0076
• 检测物种：人
• 有效期：6个月
• 保存：2–8°C
• 检测原理：双抗体一步法夹心ELISA；HRP/TMB显色；450 nm吸光度检测
• 标准曲线点：16、8、4、2、1、0.5 ng/mL
• 检测范围：0.5–16 ng/mL
• 灵敏度：< 0.1 ng/mL
• 孔内CV：< 10%；孔间CV：< 15%