该方法由世界卫生组织推荐的 Diff-Quick 和 Wright-Giemsa 染色法改进而成。适用于精子形态学、精子细胞学和前列腺细胞学染色检查。
原理
精子和细胞中等电点不同的蛋白质在相同的 pH 值下带有不同的电荷,因此它们会选择性地与不同的染色剂结合。从嗜酸性蛋白质中释放出来的氨基带有正电荷,与酸性染色剂(伊红)结合变红。从嗜碱性蛋白质中释放出的羧基带有负电荷,与碱性染色剂(亚甲蓝)结合后会染成蓝色。中性粒细胞蛋白质释放的氨基所带的正电荷与释放的羧基所带的负电荷相等,可同时与酸性染色剂和碱性染色剂结合,呈现淡紫色。不过,由于释放的电荷相等,染色效果较弱。缓冲剂可以防止酸性和碱性物质的干扰,从而获得满意的结果。
方法
将液化的精子离心 8 分钟(500 转/分),取上清液。用等渗生理盐水洗涤沉淀 2~3 次,每次 5 分钟(2,000 转/分)。对于精子较多的标本,从试管底部取液化的精子,用等渗盐水洗涤并离心 2~3 次。
洗涤后的离心沉淀加入等渗盐水重悬。按推血膜法推入切片。在空气中或通风处干燥。
用 1~2 滴染色剂 A 覆盖涂片 15~20 秒(此时染色剂可能会干)。
用 M/15 磷酸盐缓冲液洗去染色剂 A,然后将缓冲液短暂甩干。
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