用于 Illumina 的 SMARTer Target RNA Capture 是一套完整的系统,用于从富集的总 RNA 中生成 cDNA。靶向 RNA-seq 可以克服全转录组扩增(WTA)RNA-seq 实验中固有的一些挑战,提高序列覆盖率和对可能存在的低量感兴趣转录本的检测灵敏度。靶向 RNA-seq 方法还具有节约成本和简化分析的优势。在 cDNA 合成之前对感兴趣的转录本进行富集,可以捕捉到可能被漏掉或需要更多测序读数才能检测到的转录本信息,包括嵌合基因融合、转录本异构体和剪接变体。通过提高灵敏度,分析能力也得到了提高,这体现在信噪比的降低上。
在用于 Illumina 的 SMARTer 目标 RNA 捕获工作流程中,总 RNA 与用户设计的生物素化 DNA 探针杂交不到四小时,然后在捕获珠(涂有链霉亲和素的磁性颗粒)上捕获前进行纯化。之所以选择这种捕获珠,是因为它们对蛋白质和核酸的吸附性特别低,而且不会干扰下游反应,如 PCR 或反转录,从而可以在目标样本附着在珠子上时对其进行 cDNA 合成。捕获珠作为用于 Illumina 的 SMARTer 靶标 RNA 捕获试剂盒的一部分提供,也可单独出售。
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