DNA连接酶试剂 ClonExpress Ultra

用于分子生物

兼容单片段、多片段、入门克隆的一步法克隆试剂盒 快速克隆；高通量克隆；无缝克隆；DNA定点突变；双链DNA与载体组装 · 快速：5 - 15min快速重组 · 简单：一管式Mix，操作简便 · 高效：高效克隆50 bp～10 kb片段，阳性率>95% · 兼容：单片段、多片段、入门克隆三合一 · 零背景：提供零背景、氨苄/卡那双抗性载体 · 提供在线引物设计：提供在线引物设计软件CE Design 1.高度简化的实验流程 通过PCR扩增，使插入片段5’和3’最末端分别带有和线性化载体两末端一致的序列(15 - 20 bp)。用2 × ClonExpress Mix，50℃反应5-15 min，进行重组。重组产物直接转化感受态细胞，平板上会形成数百个单克隆供阳性筛选。 2.优异的克隆效率 试剂盒能够高效克隆50 bp-10 kb片段，不同长度单片段50 bp、2 kb、4.5 kb、7.5 kb、10 kb；多片段：四个片段（3 kb）、三个片段（10 kb）、五个片段（3 kb）、五个片段（6 kb），纯化后分别与pCE-Zero vector进行同源重组，重组产物转化化学感受态细胞DH5α（Vazyme #C502），菌落数如下图所示。 试剂盒独特的非连接酶依赖体系，无载体自连，克隆阳性率高达95%以上。重组产物转化平板后，各挑取50个单克隆进行菌落PCR鉴定，不同长度插入片段阳性率如下图所示。 3.广泛的体系兼容性 试剂盒兼容1至5个片段同源重组，搭配Vazyme高保真酶，PCR产物可不经过纯化直接进行克隆。重组产物转化化学感受态细胞DH5α（Vazyme #C502），XL10（Vazyme #C503），Fast-T1（Vazyme #C505），得到较高克隆效率。 4.载体序列信息及测序方案 pCE-Zero vector载体，测序时使用通用测序引物（M13）即可。 本试剂盒作为新一代的重组克隆试剂盒，可快速、高效的将1 - 5个片段定向克隆至任意载体的任意位点。该试剂盒独特的非连接酶依赖体系，降低了载体自连背景，且无需考虑插入片段自身携带的酶切位点。操作简便快捷，50℃条件下仅需5 - 15 min即可完成重组反应