金色逆转录酶是在 M-MLV(RNase H-)逆转录酶的基础上,通过体外分子进化获得的新型逆转录酶。第一链 cDNA 可在 37~55°C 下合成。金反转录酶的灵敏度、特异性、热稳定性和半衰期都有了进一步的显著提高,非常适合反转录具有复杂二级结构的 RNA 模板。金逆转录酶具有更强的聚合和延伸能力,可用于合成长 cDNA 和构建高比例的全长 cDNA 文库。
单位定义
以 Poly (rA)-Oligo (dT) 为模板/定子。在 37°C 条件下 10 分钟,加入 1 nmol dTTP(酸不溶物)所需的酶量定义为 1 单位活性(U)。
质量控制
外切酶残留检测:本品 200 U 和 50 pmol 单链 DNA 底物在 37°C 孵育 16 小时,变性 PAGE 电泳后 DNA 电泳条带无变化。
内切酶残留检测:200 U 本品与 0.3 μg pBR322 DNA 37℃孵育 4 小时,琼脂糖凝胶电泳后质粒电泳条带无变化。
RNase 残留检测:将 200 U 的产物和 1 μg 293 细胞 RNA 37℃孵育 30 分钟,琼脂糖凝胶电泳显示 RNA 的电泳条带无变化。
大肠杆菌 DNA 残留检测:用大肠杆菌 gDNA 特异性 TaqMan qPCR 检测 60 U 中的核酸残留,大肠杆菌基因组残留小于 10 个拷贝。
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