缓冲溶液试剂套装 G2002-100ML

蛋白质提取

产品简介 RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer）是一种传统的细胞及组织快速裂解液。RIPA裂解液有很多配方，按其裂解效果主要分为强，中，弱三种。RIPA强解液裂解组织、细胞得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western等对蛋白活性没有严格要求的实验。本产品主要成分包含50 mM Tris-HCl (pH 7.4)，150 mM NaCl，1 mM EDTA-2Na，1% Triton X-100，1%脱氧胆酸钠及0.1% SDS。本产品适用于动物或植物组织及细胞样品，也可用于真菌或细菌样品。 储存与运输 冰袋（wet ice）运输；2-8℃避光保存，有效期18个月。 使用方法 自备蛋白酶抑制剂。RIPA裂解液（强）在临用前需加入蛋白酶抑制剂，推荐G2006，G2007，G2008等，防止蛋白降解。以下使用方法中提到的RIPA裂解液(强)均指已添加蛋白酶抑制剂。 对于组织样品： 1. 组织块用预冷PBS（推荐G4202）洗涤，去除血污，剪成细小碎块置于匀浆器中。 2. 加入10倍组织体积RIPA裂解液(强)低温匀浆（推荐Servicebio自主研发生产的高速组织研磨仪KZ-III-F及KZ-III-FP）。注意，RIPA裂解液(强)的使用量可按照约每50 mg组织与1 mL裂解液的比例添加。如组织蛋白含量较低，可降低裂解液的用量，以提高粗提溶液中的蛋白浓度。 3. 将匀浆液转移至1.5 mL离心管中，振荡。冰浴30 min，期间每10 min用移液器反复吹打，确保组织细胞完全裂解； 4. 12000 g离心5 min，收集上清，即为总蛋白溶液。 对于贴壁细胞样品： 1. 用PBS清洗细胞2-3次，最后一次彻底吸干残留液。 2. 按照6孔板每孔细胞250 μL裂解液的比例吸取RIPA裂解液(强)于细胞培养板、瓶内，反复晃动培养板、瓶，使裂解液与细胞充分接触3-5 min。 3. 用细胞刮刀将细胞刮下，收集到离心管中。 4. 冰上裂解30 min。 5. 12000 g离心5 min，收集上清，即为总蛋白溶液。 对于悬浮细胞样品： 1. 离心收集细胞。 2. 按照6孔板每孔细胞250 μL裂解液的比例将细胞液与RIPA裂解液(强)混合，振荡。 3. 冰浴30 min，期间每10 min用移液器反复吹打数次，确保细胞完全裂解。 4. 12000 g离心5 min，收集上清，即为总蛋白溶液。 对于细菌或真菌样本： 1．取1 mL菌悬液，离心去上清，PBS洗涤一次，充分去除液体。涡旋使菌体尽量分散。 2．加入100-200 μL RIPA裂解液(强)，轻轻涡旋使菌体与裂解液充分混匀。 3．冰浴10 min，期间每2 min用移液器反复吹打数次，确保菌体完全裂解。 4．12000 g离心5 min，收集上清，即为总蛋白溶液。