2-D Quant Kit设计用于准确测定为电泳技术(如2-D电泳、SDS-PAGE或IEF)准备的样品中的蛋白质浓度。
在2%的SDS、1%的DTT、8M的尿素、2M的硫脲、4%的CHAPS、2%的Pharmalyte和2%的IPG缓冲液中准确测定蛋白质浓度。
对蛋白质进行定量沉淀,同时留下干扰物质。
在0到50 μg蛋白质的范围内有线性反应,推荐的样品量为1到50 μl。
常见的定量蛋白质的分光光度法依赖于库马西染料的结合或蛋白质催化的铜(Cu2+)离子还原为铜(Cu+)离子。染料结合试验不能在有任何同时结合染料的试剂的情况下使用。这包括载体两聚物和洗涤剂,如PlusOne CHAPS、SDS和Triton X-100。在有还原剂如DTT的情况下,或在有与铜离子形成复合物的试剂如硫脲或EDTA的情况下,不能使用依赖于铜离子还原的检测方法。
二维定量试剂盒程序通过定量沉淀蛋白质而留下干扰物质来发挥作用。该检测是基于铜离子与蛋白质的特定结合。沉淀的蛋白质被重新悬浮在含铜的溶液中,用比色剂测量未结合的铜。480纳米处的吸光度与蛋白质浓度成反比。
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