Titan HotTaq DNA聚合酶(图1)是一种改良的Titan Taq DNA聚合酶。在环境温度下,它是无活性的,没有聚合酶活性。Titan HotTaq DNA聚合酶在95-97°C下孵化15分钟后被激活,防止非特异性退火的引物和PCR设置过程中在低温下形成的引物减数器的延伸。该酶具有5'至3'聚合依赖性外切酶替代活性,但缺乏3'至5'外切酶活性。该酶具有 "延伸酶活性",允许TA克隆。
浓度:5单位/微升
单位定义:一个单位的定义是:在74°C下,30分钟内催化10nmol的dNTP纳入酸不溶性的酶的数量。
来源:纯化自大肠杆菌菌株,该菌株携带含有水生热菌DNA聚合酶改良基因的过量生产的质粒。
质量控制:该酶不含核酸和引物活性、外切酶和非特异性内切酶。SDS/PAGE - 95 kD带,纯度>98%。通过热循环测试活性和稳定性。每个周期每个核苷酸的错误率是~2.5 x 10-5;精确度是~4 x 104。估计在95℃下的半衰期为1.5小时。
储存和稀释缓冲液:50%甘油(v/v),20 mM Tris-HCl pH 8.7,25℃,100 mM KCl,0.1 mM EDTA和稳定剂。
配有:
10倍反应缓冲液1(Mg2+,不含洗涤剂)Tris-HCl和(NH4)2SO4
10倍反应缓冲液2(不含Mg2+)Tris-HCl,(NH4)2SO4和洗涤剂
25 mM MgCl2
10x 增强剂 - 有助于扩增困难模板(如富含GC的DNA模板)的添加剂。
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